Исследования артрита

Исследовательская статья
Нехватка перфорина ослабляет вызванный коллагеном артрит
Kristin Bauer , Annika Knipper , Hoang Tu-Rapp , Dirk Koczan , Hans-Jurgen Kreutzer , Horst Nizze , Eilhard Mix , Hans-Juergen Thiesen , Rikard Holmdahl and Saleh M Ibrahim

Институт Иммунологии , Ростоцкий Университет, Росток, Германия
Институт Патологии, Ростоцкий Университет, Росток, Германия
Институт Неврологии, Ростоцкий Университет, Росток, Германия
Отдел медицинских исследований опухоли, Лундский Университет, Лунд, Швеция
еmail автора соответствующий автору email

Исследование артрита и терапия 2005, 7:R877-R884doi:10.1186/ar1758

Электронная версия данной статьи полная, и ее можно найти онлайн на http://arthritis-research.com/content/7/4/R877

Резюме

Гарантированно избавляет от боли и естественным образом увеличи

Считают, что коллаген-индуцированный артрит (CIA), является заболеванием, зависящим от Т-клетки. Есть подтверждение тому, что CD8 + Т-клетки являются главным фактором контроля патогенеза CIA. Они, возможно, содействуют определенным проявлениям заболевания, а именно разрушению ткани и синовиальной гиперплазии. В этом исследовании мы изучили роль перфорина (pfp) в патогенезе CIA, основной цитотоксической молекулы, которая выражается CD8 + Т-клетки. Мы получили DBA/1J мышей, страдающих мутациями pfp молекулы, DBA/1J-pfp-/-, и изучили их восприимчивость к артриту. В результате, у мыши, лишенной pfp, наблюдались ослабленная атака (DBA/1J-pfp+/+, 64%; DBA/1J-pfp-/-, 54%), немного замедленное начало (начало заболевания: DBA/1J-pfp+/+, 53 ± 3.6; DBA/1J-pfp-/-, 59 ± 4.9 (mean ± SEM)) и более мягкая форма заболевания (максимальный бал заболевания DBA/1J-pfp+/+, 7.3 ± 1.1; DBA/1J-pfp-/-, 3.4 ± 1.4 (mean ± SEM); P < 0.05). Одновременно пролиферация периферальной Т-клетки в ответ на специфический антигенный бычий коллаген второго типа у pfp-/- мышей возросла по сравнению с pfp+/+мышами. Таким образом, цитотоксия, опосредованная pfp-, принимает участие в инициации повреждения ткани при артрите, но независящие от pfp- цитотоксические проводные пути могут также способствовать появлению CIA.

Введение

Коллаген-индуцированный артрит (CIA) является экспериментальной моделью артрита, вызываемого в штаммах мышей, например, DBA1/J, при помощи иммунизации бычьим коллагеном второго типа (CII) в совершенном вспомогательном средстве Фроунда (CFA) [1-4]. Известно, что развитие CIA зависит от Т-клеток, и восприимчивость к заболеванию связана с большим комплексом гистосовместимости части тела [5]. После активации Т-клетки, запускается воспалительный каскад, затрагивающий Т-клетки, макрофаги/моноциты, Б-клетки и активизированные синовициты. Различные типы лейкоцитов и синовиальных клеток производят комплексное множество цитокинов и других растворимых посредников, которые считаются ответственными за разрушение хряща и эрозию кости [6-9]. Некоторые главные признаки заболевания – синовиальная гиперплазия и моноядерная клеточная инфильтрация. Факторы, сопутствующие этому феномену, неизвестны; однако, недавние исследования ревматоидного синовиума, демонстрирующего, что распространена апоптозия синовиальных клеток и инфильтрирующих лимфоцитов, говорят о нарушении баланса между темпом клеточной пролиферации и клеточной смертью (апоптозией) [10,11]. В иммунной системе апоптозия вовлечена в развитие и негативный отбор лимфоцитов. Это также очень важно в регулировании иммунной реакции на чужеродные антигены. Цитотоксические Т-лимфоциты и другие клетки-киллеры могут устранять свои цели стимуляцией смерти клетки. Все эти функции служат связующим звеном рецепторов Fas/APO-1, рецептора фактора некроза опухоли 1 (TNFR1; p55 TNFR) и перфорина (pfp)/грэнзимного проводного пути [12,13].

Перфорин главным образом выражается в активизированных цитотоксических Т-лимфоцитах (CTLs) клетках – естественных разрушителях, хотя некоторые предполагают его проявление также и в микроглии [14]. В CTLs pfp накапливаетя в цитоплазмических гранулах и является главной причиной католиза. При выходе pfp попадает в мембрану плазмы нужных клеток и полимеризируется в агрегаты, формирующие поры. Pfp поры приводят к осмотическому лизису клеток и вызывают апоптозию при внедрении грэнзимов в клетки. Мыши с недостатком перфорина подтвердили свою функцию эффекторной молекулы в иммунной реакции на вирусы и опухоли, а также в таких аспектах иммунной регуляции как смерть клетки по причине активизации, выработка антител и спонтанный иммунитет [15-17]. NOD мыши являются наглядным примером диабетиков, зависящих от инсулина, с мутацией pfp гена (NOD/pfp-мыши). Диабет у них развивается гораздо медленнее, а его начало происходит позднее, что указывает на роль pfp смертельного проводного пути в повреждении ткани при таком заболевании.[18]

Роль pfp в развитии артрита пока неясна, хотя некоторые исследователи имеют некоторые мнения касательно его роли в патогенезе смерти, например, pfp , выделяющий CTLs, был продемонстрирован при ревматоидном синовиуме, а мыши с нехваткой CD8 кажутся менее восприимчивыми к коллаген-индуцированному артриту[19].

Возможно, что pfp/грэнзимный проводной путь способствует патологии артрита, по крайней мере, двумя способами: продвижение автоиммунитета путем блокировки периферальной толерантности и AICD или разрушение ткани-мишени. В этом исследовании мы сделали попытку оценить роль опосредованного pfp смертельного проводного пути в патогенезе CIA, используя мышей с недостатком pfp (pfp-/-) и, изучая эффект мутации в клиническом течении заболевания, иммунной реакции на коллаген и в патологии сустава.

Материалы и методы

Мыши
Мыши с дефицитом перфорина были недоступны на фоне DBA/1J. Мы получили pfp-/- C57BL/6J (B6) мышей, порожденных, как описано ранее, из Джексон лабораторий (Bar Harbor, ME, USA). Эти мыши скрещивались на DBA/1J фоне, восприимчивом к CIA на протяжении 14 поколений. Мыши размножались как гoмoзиготные мутанты, а за этим следовал PCR анализ ограниченного при передаче по наследству DNA. Чтобы произвести гомозиготных pfp-/- мышей для эксперимента, были скрещены гетерозиготные мыши с дефицитом pfp. Успешное скрещивание было оценено с помощью PCR анализа положения MHC-H2 на генной карте [20]. Для селекции гетерозиготных с дефицитом pfp мышей, были использованы такие праймеры как 5'-TTT TTG AGA CCC TGT AGA CCC A-3' (pfp1) и 5'-GCA TCG CCT TCT ATC GCC TTC T-3' (pfp2). Для селекции гомозиготных мышей с дефицитом pfp, был использован pfp3 праймер (5'-CCG GTC CTG AAC TCC TGG CCA A-3') в сочетании с pfp4 праймером (5'-CCC CTG CAC ACA TTA CTG GAA G-3'). Микроспутниковые маркеры (Metabion GmbH, Planegg-Martinsried, Германия), окружающие pfp ген, были использованы для определения размера C57BL/6J DNA фрагмента у мыши-мутанта. Усиленные микроспутники были отделены и анализированы на денатурирующих гелях полиакриламида и выявлены при помощи LI-COR Model 4200L автоматизированного DNA сиквенсора (LI-COR Inc., Lincoln, NE, USA). Для экспериментов были использованы мыши-самцы в возрасте от 8 до 16 недель. Животных содержали в соответствии со всеми стандартами Ростокского университета. Все эксперименты были одобрены соответствующими органами земли Mecklenburg-Vorpommern, Германия.

Стимуляция и клиническая оценка коллаген-индуцированного артрита
Мыши подходящего возраста были иммунизированы 125 μg бычьим CII (Chondrex, Redmond, WA, USA), эмульсированным в CFA (несовершенное вспомогательное средство Фроунда, содержащее 4 mg/ml Mycobacterium tuberculosis; Difco Laboratories, Detroit, IL, USA) или были иммунизированы только CFA. На 21 день мыши получили еще 125μg бычьего CII в несоцершенном вспомогательном средстве Фроунда, и у них была взята сыворотка. Клиническая картина была оценена непосредственно перед иммунизацией и через три недели. Воспаление на 4 лапах было оценено следующим образом: 0 – нет воспаления; 1 – увеличение или покраснение одного сустава; 2 – увеличение или покраснение более, чем одного сустава, или воспаление средней тяжести целой лапы; 3 – серьезное воспаление всей лапы или анкилоз (неподвижность сустава). Мыши, иммунизированные CFA, служили средством контроля.

Реакция Т-клеток на пролиферацию
Гарантированно избавляет от боли и естественным образом увеличи

Подколенные, преперетаниальные, паховые, брыжейковые, подмышечные и шейные лимфатические узлы были удалены в асептических условиях. Были приготовлены одноклеточные суспензии одноядерных клеток удаленных лимфатических узлов отдельных мышей. Клетки были культивированы в триплеты в 96 чашках с плоским дном с концентрацией 2 х 106 клеток в 200 мл среды (RPMI 1640 с Glutamax-II дополненный 50 IU/мл пенициллина, 60 μ г / мл стрептомицина (Gibco, Карлсруэ, Германия) и 5% тепло-инактивированной сывороткой плода теленка). Для исследования реакции на антиген, провели стимуляцию лимфоцитов 10, 1 или 0,1 μ г / мл бычьего CII; 4 μ г / мл конканавалина (Difco) были использованы в качестве позитивного контроля, а среда была лишь использована в качестве негативного контроля. Клетки инкубировали в течение 72 часов при температуре 37 ° С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СО2. Для оценки пролиферации синтеза ДНК, в течение последних 12 часов культуры клеткам вводили 1 μCi [3H] тимидина. Клетки собрали на фильтры из стекловолокна, и [3H] тимидин-включения были измерены в жидком β-сцинтилляционном счетчике. Результаты были выражены одиночными импульсами в минуту.

Цитокин ELISA
Для анализа производства цитокина, клетки культивируются как описано выше; супернатант был собран in vitro. Концентрации IFN-γ в супернатантах определялись прибором цитоэкранного иммуноанализа (BioSource, Камарильо, штат Калифорния, США) в соответствии с инструкциями изготовителя. Короче говоря, лимфоцитный супернатант был добавлен к ELISA-пластине, покрытой моноклонольными антителами, характерными для IFN-γ мыши. После инкубацонного периода и мытья было добавлено биотинилованное поликлональное антитело, характерное для IFN-γ мыши. Затем стрептавидин-пераксидаз, а позднее и раствор субстрата были добавлены для выявления продуктов реакции.

Анализ Анти-СII антител
Сыворотка мышей была проанализирована с помощью ELISA для количественного определения IgG антител на фоне CII. Микро- ELISA пластины при температуре 4 ° C были покрыты с вечера 5 μg/ml бычьего CII в каждом источнике. После мытья были добавлены сыворотки и инкубировались при температуре 37 ° C в течение 2 часов. Спустя час инкубации при температуре 37 ° C с анти-мышиным IgG коньюгированный с алкалиновым фосфатазом (Pharmingen BD), был добавлен п-нитрофенилфосфат, содержащий субстрат буфера (Sigma), а 3 M NaOH был использован для остановки реакции. Пластины были зачитаны на 405 нм.

Гистопатология
Мышей убили, а лапки отрезали и затeм зафиксировали в 4% растворе параформальдегида. После 2-3-недельной декальцификации в растворе EDTA, лапки были помещены в парафин. Лапки порезали на секции и отметили как Н и Е. Оценка заболевания была произведена, опираясь на выше описанную шкалу [21]: 1- синовиальная гиперплазия; 2 – начало развития паннуса; 3 – эрозия кости и хряща; 4 – тяжелое воспаление и эрозии.

Сортировочный анализ флюоресцентно-активированных клеток
Для определения Т-клеточных, Б-клеточных и НК-клеточных популяций в различных pfp-мышах, лимфоциты были изолированы и помечены флюоресцин изотиоцианатом (FITC), помеченным как анти-CD4 антитело (Pharmingen; клон H129.19), фикоэритрином, помеченным как анти-CD8a тело (Pharmingen; клон 43-6.7), FITC, помеченным как анти-CD45R/B220 антитело (Pharmingen; клон RA3-6B2), фикоэритрином, помеченным как анти-CD90 антитело (Pharmingen; клон OX-7), и анти-IgG-биотином и стрептавидином-FITC до анализа FACScan (Becton Dickinson; с помощью Cell Quest программного обеспечения версии 1.2.2).

Статистика
Статистическая оценка была произведена с помощью SPSS программного обеспечения. Для анализа различий в клинических результатах был произведен Mann-Whitney тест. Для случайных расчетов были использованы X 2 and Fisher тесты. Для анализа различий в производстве цитокина и пролиферации Т-клетки, был использован неспаренный т-тест студентов. Отличия были существенными при P <0,05.

Результаты

Характеристика мышей с дефицитом pfp- DBA/1J
Изначально, мыши с дефицитом pfp были получены из C57BL/6J штамма с помощью трансфера эмбрионной стволовой клетки. Поскольку этот штамм является стойким к CIA стимуляции, мы скрещивали мышей в 14 поколениях для получения CIA чувствительного DBA/1J фона. Рfp ген расположен в хромосоме 10 на 36 cM, а мутированный ген был наследован как C57BL/6J фрагмент примерно 10 cM между приблизительно 28 and 39 cM (Таблица 1). Чтобы исключить возможность того, что скрещивание с DBA/1J штаммом ведет к дефекту в созревании Т-клеток, Б-клеток или НК-клеток, мы изучили распределение этих различных иммуных клеточных популяций с помощью флюоресцентно-активированной клеточной сортировки. Было обнаружено, что Т лимфоциты, выражающие CD4 и CD8, а также CD90+ клетки (CD90 выражается на T клетках и НК клетках) и CD45R/B220-положительные клетки (B клетки, активированные клетки-киллеры) присутствовали в сопоставимых процентных соотношениях у гетерозиготных и с дефицитом pfp- DBA/1J мышей, указывая на то, что недостаток pfp не влиял на развитие этих клеточных популяций в DBA/1J штамме (данные не показаны). Недостаток pfp выражения в активированных Т клетках pfp-/- мышей был подтвержден RNA уровнем при RT-PCR (см. 1).

Мыши с дефицитом pfp менее восприимчивы к коллаген-индуцированному артриту
Для изучения роли pfp в коллаген-индуцированном артрите мы иммунизировали бычьим CII CFA DBA-pfp-/-, DBA-pfp+/- и DBA-pfp+/+ мышей. Как показано на рис.1 и табл.2, мыши с дефицитом pfp имели менее серьезные случаи заболевания с более низкими клиническими показателями, чем мыши с неповрежденным pfp. DBA-pfp-/- мыши также показали тенденцию к задержке начала CIA. Мыши с неповрежденным pfp (pfp+/+ и pfp+/-) имели среднюю заболеваемость 64%, в то время как pfp-/- мыши показали значение, равное 54% (Рис.1). Тяжесть заболевания снизилась на 50 день иммунизации (pfp-/-, 0.9 ? 0.86; pfp+/-, 1.4 ? 0.67; pfp+/+, 1.3 ? 0.47 (means ? SEM)), и на 75 день (pfp-/-, 2.1 ? 1.7; pfp+/-, 3.8 ? 1; pfp+/+, 5.2 ? 1.2), и значительно снизился на 82 (pfp-/-, 3.0 ? 1.5; pfp+/-, 4.0 ? 0.9; pfp+/+, 5.6 ? 0.9; P < 0.05). Максимальная оценка, вычисленная как среднее значение максималных оценок для каждой отдельной мыши данного генотипа, также значительно снизилась у мышей с недостатком pfp (pfp-/- 3.4 ? 1.45) по сравнению с pfp+/+ мышами (7.3 ? 1.14; Рис. 1). В дополнение, площадь под кривой, как мера тяжести, начало и продолжение, были значительно ниже у pfp-/- мышей, чем у мышей имеющих pfp (pfp-/-, 31.9 ? 23; pfp+/-, 44.6 ? 12.3).

Гистопатологические черты CIA не меняют дефицит pfp
Для исследования гистопатологии суставов, были взяты лапки pfp-/- и pfp+/- мышей с CIA, H & E-маркированные и отмеченные как неясные признаки артрита. Результаты (Рис. 2) обнаруживают что pfp-/- мыши могут развиват серьезные артриты с типичными признаками CIA, а именно пролиферация синовиоцитов, инфильтрация клетками воспаления, развитие паннуса и эррозия костей и суставов. Сравнение двух генотипов, отсутствие разницы в гистопатологическом развитии заболевания были на лицо (Рис. 2).

Недостаток pfp не влияет на реакцию антител на коллаген
Исследуя роль pfp в гуморальной иммунной реакции коллагена, были получены сыворотки от pfp-/-, pfp+/- и pfp+/+ мышей на 0 и 21 день после иммунизации, и были измерены уровни CII-специфичных IgG антител количественно ELISA. Были видны незначительные вариации уровней анти -CII-специфичного IgG между pfp-/- и pfp+/- или pfp+/+ маркировками (Fig. 3). Pfp-дефицитные мыши показали близкое значение анти -CII антител 233 ± 51.1, и контрольная группа имела близкое значение анти -CII антител 306 ± 50.8 на 21 после иммунизации. Эти данные показывают, что даже без pfp мыши развивают силную гуморальную иммунную реакцию на CII, предполагая, что нехватка pfp не влияет на реакцию анти-CII антител.

Pfp-/- мыши поднимают усиленную пролиферацию Т клеточноой реакции в отношении CII
Для изучения того, будет ли влиять на Т клеточную реакцию на CII, дренирование лимфатических узлов, иммунизированных pfp-/- и pfp+/+, была изучена пролиферативная реакция на телячий CII. Перфорин-дефицитные мыши показали усиленную Т клеточную пролиферацию по сравнению с мышами pfp дикого типа. Как показано на Рис. 3, после стимуляции 0.1 μg/ml CII, pfp-/- мыши показали значительно повышенную Т клеточную пролиферацию 12,835 ± 2,750 cpm по сравнению с 4,727 ± 1,268 cpm у pfp+/+ мышей; в CII концентрации 1 μg/ml Т клеточная пролиферация также значително возрасла у pfp-дефицитных мышей (32,209 ± 6,764 cpm) в сравнении с диким типом pfp-мышей (21,904 ± 2,626 cpm). IFN-γ продукция T клеток у мышей была измерена ELISA, но значительной разницы между pfp-/- и pfp+/+ мышами не наблюдалось (информация не показана).

Обсуждение

Первоначальной целью данного исследования было изучение того, что наблюдаемое ранее запоздалое начало и артрит средней тяжести у CD8-/- мышей [19] является следствием недостатка цитотоксической способности или недостатком некоторых других аспектов Т клеточной функции, такой как секреция цитокинов. Мы обнаружили, что у pfp-дефицитных мышей заболевание развивается с более слабыми клиническими проявлениями, немного задержанным началом и значительно уменьшенной тяжестью, предполагая, что CTL активность важна для инициации и развития артрита в CIA модели. Такое предположение совпадает с предыдущими исследованиями (NOD) модели мышей, страдающих диабетом и зависящих от инсулина. В этой модели, как и в CIA, pfp более восприимчив, чем защитный ген. Это является противоположностью другим моделям заболевания, например, экспериментальному автоиммунному энцефаломиелиту (EAE), системной красной волчанке (SLE) и автоиммунному панкреатиту, в которых pfp явно выступает как барьер для заболевания [16-18,22]. Защитные действия pfp нельзя было объяснить его иммунной регуляторной функцией, а именно умерщвление автореактивных Б клеток и функциональный самолизис активированных Т клеток посредством AICD. Следовательно, его роль в регуляции периферальной толерантности и автоиммунитете, который отличается, но частично совпадает, и роль FasL/Fas and TNF/TNFR проводных путей могут служить причиной ускоренного автоиммунитета у pfp-дефицитных мышей в EAE и SLE моделях.

В настоящем исследовании мы получили доказательство того, что pfp может также действовать скорее как ген восприимчивости, чем защитный ген. Недостаток молекулы привел к ослаблению заболевания, незначительной задержке заболевания и уменьшенной активности CIA. Однако, мы также наблюдали сильную Б-клеточную реакцию на анти-коллаген с похожими уровнями анти-коллаген специфичных иммуноглобулинов в контрольной группе и группе pfp-/- мышей, и значительно увеличенную Т клеточную пролиферацию в реакции на коллаген. Это могло быть в результате уменьшенного умерщвления и скопления автореактивных Т клеток после активации замедленных AICD. Эти открытия указывают на то, что уменьшенная адаптивная реакция на коллаген не являтся причиной ослабленного артрита.

Предыдущие исследования демонстрировали сильное вовлечение pfp в контроль CD8+ T клеточного гомеостаза. Дефицит перфорина возник в результате усиленной CD8+ T клеточной экспансии из-за уменьшенного умерщвления клеток, представляющих коллаген, и последовательной продолжительной стимуляции антигенами [23,24]. Наши результаты поддерживают эти утверждения: мы наблюдали значительно увеличенную Т клеточную пролиферацию у pfp-дефицитных мышей по сравнению с группами контроля. Эти сведения также подверждают роль pfp в регуляции Т клеточного гомеостаза. Тем не менее, цитокины, продуцированные цитотоксическими Т клетками, такзже вовлечены в регуляцию Т клеточной реакции. TNF-α, например, может медиировать AICD CD8+ T клеток посредством TNFR1 и TNFR2 [25].

Гистопатология CIA у pfp+/+ мышей дикого типа в данном исследовании была сходна с гистопатологией, наблюдавшейся в предыдущих исследованиях [26]. Данные здесь опять не приводятся. В настоящем исследовании значительные отличия между гистопатологическими изменениями у pfp+/- и pfp-/- мышей не наблюдались, вероятнее всего, по причине тяжести заболевания у отдельных pfp-/- мышей. Этот результат убеждает в дополнительном участии pfp-независимых смертельных проводных путей в разрушении сустава. Действительно, pfp увеличилось в воспаленных артритом суставах дикого типа мышей, как показано RT-PCR (1).

Это открытие схоже с нашим недавним открытием, показывающим, что FasL/Fas проводной путь имеет про-воспалительную роль в CIA и активирующую функцию на фибробластах in vitro [27]. У Fas-дефицитных мышей развивалась менее тяжелая форма артрита, возможно, из-за редуцированного IL-1R1/Toll-like рецептора-4, указывающего на то, что это могло способствовать меньшему выражению других цитокинов, хемокинов и матричных металлопротеиназ, потенциально регулированных этим проводным путем [28]. В предыдущих исследованиях также говорилось о сильном участии TNF/TNFR проводного пути, поскольку CIA развивался только со сниженным шансом заболевания, а тяжесть и нейтрализация TNF вели к предотвращению артрита [29,30].

В целом результаты указывают на то, что провоцирующий заболевание pfp-эффект превалирует в CIA. Но все же хотелось бы порассуждать о том, что pfp мог бы содействовать возникновению артрита по крайней мере двумя способами. Во-первых, он мог способствовать повреждению ткани прямым цитотоксическим действием посредством CD8+ T клетки и NK клетки. Во-вторых, у pfp могли быть некоторые активирующие функции на фибробласты или макрофаги, ведущие к продукции про-воспалительных цитокинов. Действительно, существуют статьи, показывающие, что фибробласты и моноциты могут быть активированы гранзимом А для секреции провоспалительных цитокинов IL-6, IL-8 и TNF-α, которые позже могли строго регулировать воспалительную реакцию. [31,32].

Существуют и другие доказательства важной роли pfp в артрите. Было обнаружено, что перфорин по-разному выражается в лимфотических узлах и суставах DBA/1J и FVB/N (CIA-стойкий штамм) мышей (СМ Ибрагим и Д Кожан, неопубликованные исследования) и pfp-выражающие цитотоксические Т лимфоциты и увеличенный апоптоз наблюдались синовии пациентов с ревматоидным артритом [10,33,34]. Целевой pfp ген похоже не имеет особого значения в наблюдаемых результатах, на основе отсутствия pfp продукции, хотя возможно, что другие полиморфические гены тоже могли содействовать CIA редукции. Действительно, pfp ген относится к CIA- восприимчивому положению гена Cia8 в хромосоме 10. Это количественное характерное положение гена покрывается 12 cM C57BL/6J фрагментом, включающим мутировавший pfp ген. Cia8 область содержит несколько генов-кандидатов, которые были вовлечены в модуляцию CIA восприимчивости, например, наследственный фактор миграции макрофага Mif [35] и автоиммунный регулятор Aire [36]. Однако, наблюдение за тем, что гетерозиготные особи и pfp+/+ мыши, которые тоже были скрещены и содержали такие же или меньшие C57BL/6J фрагменты, не имеют влияния на болезнь по сравнению с главной ролью другого гена.

CIA у pfp-дефицитных мышей был средней тяжести, наблюдалась задержка начала заболевания и замедленное его развитие, но у некоторых pfp-/- mice также развивалось тяжелое заболевание. Эти результаты говорят о том, что pfp-зависимая цитотоксичность участвует в инициации повреждения ткани при артрите, но pfp-независимые цитотоксические смертельные проводные пути, например, FasL/Fas проводной путь, тоже могли содействовать CIA.

Заключение

Мы высказываем мнение о том, что артрит развивался в замедленной форме, с меньшей тяжестью и задержкой начала у pfp-дефицитных DBA/1J мышей. Эти открытия говорят о том, что pfp-зависимая цитотоксичность участвует в инциации повреждения ткани при артрите, но также и о том, что один или несколько других pfp-независимых механизмов, возможно бключающие FasL/Fas, содействуют ранней фазе разрушения сустава в CIA.

AICD = клеточная смерть, индуцированная активацией; CFA = совершенное вспомогательное средство Фроунда; CIA = коллаген-индуцированный артрит; CII = коллаген второго типа; CTL = цитотоксический T лимфоцит; EAE = экспериментальный автоиммунный энцефаломиелит; ELISA = энзим-связанный иммунносорбентный образец; FITC = флюоресцин изоцианат; H & E = гематоксилин и эозин; IFN = интерферон; IL = интерлейкин; MHC = основной комплекс гистосовместимости; NK = натуральный киллер; RT-PCR = обратная транскриптазная полимеразная цепная реакция; pfp = перфорин; SLE = системная красная волчанка; TNF = фактор некроза опухоли.

Конкурирующие интересы

Автор(ы) утверждают, что они не преследуют других целей.

Вклад авторов

KB, AK и HTR провели экспериментальную работу и содействовали написанию манускрипта. KB и AK в одинаковой мере содействовали работе.DK, HJT, RH и SMI принимали участие в дизайне и координации исследования, составляли план манускрипта. HJK и HN провели гистопатологию. EM произвел Т клеточную пролиферацию и образцы цотоксинов. Все авторы прочли и одобрили окончательный вариант манускрипта.

Благодарность